一、服務(wù)簡介

      CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一種來自細(xì)菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在細(xì)菌及古細(xì)菌中，CRISPR系統(tǒng)共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關(guān)蛋白（Cas蛋白）共同發(fā)揮作用，而Ⅱ類系統(tǒng)只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應(yīng)用提供了便利條件。目前，來自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系統(tǒng)應(yīng)用較為廣泛。

      Cas9蛋白（含有兩個核酸酶結(jié)構(gòu)域，可以分別切割DNA兩條單鏈）。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結(jié)合成復(fù)合物，然后通過PAM序列結(jié)合并侵入DNA，形成RNA-DNA復(fù)合結(jié)構(gòu)，進(jìn)而對目的DNA雙鏈進(jìn)行切割，使DNA雙鏈斷裂。由于PAM序列結(jié)構(gòu)簡單（5’-NGG-3’），幾乎可以在所有的基因中都能找到大量靶點，因此得到廣泛的應(yīng)用。CRISPR/Cas9技術(shù)已經(jīng)成功應(yīng)用于植物、細(xì)菌、酵母、魚類及哺乳動物細(xì)胞，是目前較高效的基因組編輯技術(shù)。

二、技術(shù)流程

    1、針對敲除目的基因設(shè)計合適靶點；

    2、構(gòu)建 cas9-gRNA表達(dá)質(zhì)粒并測序驗證；

    3、目的細(xì)胞培養(yǎng)，并將構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞；

    4、抗性篩選獲得單克隆細(xì)胞；

    5、基因敲除細(xì)胞系的檢測

三、服務(wù)說明

   1、細(xì)胞株必須是單核貼壁細(xì)胞，可以穩(wěn)定傳代；

   2、敲除目的基因后，細(xì)胞不至死；

   3、此活動針對的是定制單基因敲除細(xì)胞系。

四、 詢價及訂購

感謝您選擇我公司的Crispr/Cas9服務(wù)。如有相關(guān)問題請聯(lián)系我們的工作人員。